LB broth 만들기

LB broth 만드는 방법!

LB는 Luria-Bertani의 준말

E.coli를 키울때 사용하는 배지

준비물

증류수(distilled water), tryptone, NaCl, yeast extract

기본적으로 1L를 기준으로

NaCl -10g
tryptone - 10g
yeast extract - 5g

이 필요

200ml만 만든다면?
NaCl - 2g
tryptone - 2g
yeast extract - 1g

이 비율만 기억하고 있으면 쉽게 만들 수 있다.


1L제작

1. 비커에 magnetic bar를 넣고 stirrer에 올린다.
2. 증류수를 900ml넣어준다.
3. NaCl - 10g, tryptone - 10g, yeast extract 5g을 넣고 잘 섞는다.
4. 가루가 안보이고 노랗게 변하면 완성! 한시간정도 섞은 뒤, 증류수를 추가로 넣어 1L를 맞춘다.
5. 1L bottle에 옮긴 뒤 Autoclave 돌려준다.
6. 식힌 뒤 필요에 따라 ampicillin이나 kanamycin 등의 항생제를 넣어준다.
(ampicillin 은 50mg/ml로 분주, LB 1000ml의 경우 1000ul넣어준다. kanamycin 은 10mg/ml로 분주, LB 1000ml의 경우 5000ul넣어준다. 결국 전체농도가 50ug/ml가 된다.)


이렇게 만든 LB broth로 mini-prep이나 maxi-prep 수행한다.